Como funciona uma Micropipeta

Uma micropipeta de deslocamento de ar, usada para aplicações de pipetagem padrão, é altamente precisa. No entanto, condições como temperatura, pressão atmosférica, bem como a gravidade específica e a viscosidade da solução podem afetar o desempenho das micropipetas de deslocamento de ar.

Principio de funcionamento de uma Micropipeta

O pistão da micropipeta se move para a posição apropriada quando o volume é ajustado.
Quando o botão de operação é pressionado até a primeira parada, o pistão expele o mesmo volume de ar indicado na configuração do volume.
Depois de mergulhar a ponta no líquido, o botão de operação é liberado. Isso cria um vácuo parcial e o volume especificado de líquido é aspirado para a ponta.
Quando o botão de operação é pressionado até a primeira parada novamente, o ar dispensa o líquido. Para esvaziar completamente a ponta da micropipeta, o botão de operação é pressionado até a segunda parada (blow out).

Fatores que afetam a precisão de uma Micropipeta

Temperatura

O fator mais importante na precisão da micropipeta é a temperatura do líquido. A figura abaixo mostra a mudança de volume quando o líquido tem uma temperatura diferente da micropipeta e do ar. Se a temperatura do líquido, pipeta e ar for a mesma, a precisão não será afetada significativamente.

Densidade

A densidade é a relação massa/volume do líquido. A densidade varia de acordo com a temperatura e a pressão do ar. Normalmente, a densidade da água é de 0,996 g/cm³, para o etanol 0,79 g/cm³e para o ácido sulfúrico (H2SO4) 1,85 g/cm³.

Altitude

A altitude geográfica afeta a precisão através da pressão do ar. A pressão do ar diminui em altitudes mais elevadas e o fator de conversão Z também diminui. O ponto de ebulição de alguns líquidos também pode mudar para muito próximo da temperatura ambiente, aumentando drasticamente a perda por evaporação.

Micropipeta com deslocamento positivo

A micropipeta de deslocamento positivo é usada para aplicações como PCR e outras técnicas de amplificação de DNA. As pontas de micro-seringa usadas em pipetas de deslocamento positivo são descartáveis. Isso ajuda a evitar a contaminação cruzada de amostra para amostra (também conhecida como transferência de amostra) e a contaminação devido ao efeito aerossol.

Princípio de funcionamento de uma micropipeta com deslocamento positivo

O pistão se move para a posição apropriada quando o volume é ajustado.
Quando o botão de operação é pressionado até o batente, o pistão desce até a abertura da ponta.
Depois que a ponta é imersa no líquido, o botão de operação é liberado. O êmbolo é então levantado e um vácuo parcial é criado. Isso faz com que o líquido entre na ponta.
Quando o botão de operação é pressionado novamente, o pistão desce, expelindo o líquido da ponta.

Técnica para pipetagem utilizando micropipetas

Diretrizes gerais

Verifique sua micropipeta no início do dia de trabalho quanto a poeira e sujeira do lado de fora. Se necessário, limpe com etanol 70%.

Defina o volume dentro da faixa especificada para a micropipeta.

Segure a micropipeta de forma que o "descanso de dedo aderente" fique apoiado no dedo indicador.

Para maximizar a precisão, a micropipeta, a ponteira e o líquido devem estar na mesma temperatura.

Verifique se você está usando pontas recomendadas para esta micropipeta. Para garantir a precisão, use apenas pontas de alta qualidade feitas de polipropileno livre de contaminação.

As pontas são projetadas para uso único. Eles não devem ser limpos para reutilização, pois suas características metrológicas não serão mais confiáveis.

*O pré-enxágue (1-3 vezes) da ponta com o líquido a ser pipetado pode melhorar a precisão, especialmente ao usar pontas de deslocamento positivo.

Evite virar a micropipeta de lado quando houver líquido na ponteira. O líquido pode ir para o interior da micropipeta e contaminá-la.

Evite a contaminação de ou para os dedos usando o ejetor de ponta e luvas.

Armazene as micropipetas na posição vertical quando não estiverem em uso. Os suportes de micropipeta são ideais para essa finalidade.

Verifique a calibração regularmente, dependendo da frequência de uso e da aplicação, mas pelo menos uma vez por ano. Se usado diariamente, recomenda-se um intervalo de três meses. Siga as instruções para recalibração no manual de instruções do fabricante.

Pipetagem direta utilizando micropipetas

Pressione o botão de operação até a segunda parada.
Mergulhe a ponta na solução a uma profundidade de 1 cm e solte lentamente o botão de operação. Esta ação preencherá a ponta com um volume maior que o volume definido. Aguarde 1-2 segundos e retire a ponta do líquido, tocando-a contra a borda do reservatório para remover o excesso de líquido.
Dispense o líquido no recipiente receptor pressionando o botão de operação suave e firmemente até a primeira parada. Este volume é igual ao volume definido. Mantenha o botão pressionado nesta posição. Algum líquido permanecerá na ponta e não deve ser dispensado.
O líquido restante na ponta pode ser pipetado de volta para a solução original ou descartado junto com a ponta.
Solte o botão de operação para a posição pronta.

Técnica de pipetagem reversa com micropipeta

A técnica reversa é usada para pipetagem de soluções com alta viscosidade ou tendência a espumar. A pipetagem reversa só é possível com micropipetas de deslocamento de ar.
- Pressione o botão de operação até a segunda parada.
- Mergulhe a ponta na solução a uma profundidade de 1 cm e solte lentamente o botão de operação. Esta ação preencherá a ponta com um volume maior que o volume definido. Aguarde 1-2 segundos e retire a ponta do líquido, tocando-a contra a borda do reservatório para remover o excesso de líquido.
- Dispense o líquido no recipiente receptor pressionando o botão de operação suave e firmemente até a primeira parada. Este volume é igual ao volume definido. Mantenha o botão pressionado nesta posição. Algum líquido permanecerá na ponta e não deve ser dispensado.
- O líquido restante na ponta pode ser pipetado de volta para a solução original ou descartado junto com a ponta.
- Solte o botão de operação para a posição pronta.

Normas ASTM relacionadas

ASTM E542-01, Prática padrão para Calibração de Laboratório volumétrica Apparatus, ASTM International, West Conshohocken, PA, 2001, www.astm.org

ASTM E969-02, Especificação padrão para vidro volumétrico (Transfer) Pipetas, ASTM International, West Conshohocken, PA, 2002, www.astm.org

ASTM E1878-97, Especificação padrão para laboratório de vidro Garrafas Volumetric, uso especial, ASTM International, West Conshohocken, PA, 1997, www.astm.org